高效液相色谱柱的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

  高效液相色谱柱故障排除

  1、柱压过高

  可能是微粒堵塞,柱床膨胀不可逆吸附,细菌生长等造成的。也有可能是系统反压问题,例如阻尼器堵塞,进样器堵塞,管路或连接口堵塞.在线过滤器不干净,压力传感器不准确等。

  2、重复性差、不出峰、回收率低可能是色谱柱被污染,流动相pH值或者组成不合适造成固定相损失,样品溶剂不同或样品本身不稳定,固定相极性过强或者流动相极性过弱.或者发生非特异性吸附。也可能梯度实验时平衡时间不足,温度波动,流动相组成改变,样品溶剂不同,样品稳定性不好,方法的开发不好,缓冲液的酸碱度不合适或者缓冲能力不足。

  3、柱效低

  可能是色谱柱被污染、过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成,例如流动相pH值或者组成不合适造成固定相损失。流动相急剧变化造成固定相物理损坏,机械振动造成固定相产生裂缝,柱床收缩或干枯。也有可能是仪器连接的问题,认真检查进样器、检测器、管路、保护柱和在线过滤器等是否连接好,也可能是色谱柱没有平衡好,进样量过大等问题。